百奧賽圖建設有高質量的抗體藥表征分析服務團隊,依托于平臺全面先進的檢測儀器,可以提供從抗體藥物開發,先導分子篩選以及臨床前申報等全方位、高質量的一站式檢測服務。我們在過去的2年中,已經針對20多個靶點開發了包括各種生物活性、親和力等生物學分析方法,并在蛋白生化表征方面積累了大量經驗,以支持抗體藥物的開發進程。同時團隊可以根據客戶的具體需求快速完成方法的轉移,優化及驗證。

部分分析方法舉例:


表征分析類型分析項目分析方法

結合活性

蛋白質結合/抑制ELISA(EC50,IC50)
細胞結合/抑制FACS(EC50、IC50)
分子互作分析親和力Biacore
Fc受體與補體C1q結合親和力Biacore
一級結構完整分子量或還原/脫糖分子量

LC-MSMS

N端及C端測序

LC-MSMS

二硫鍵分析

LC-MSMS

序列覆蓋率

LC-MSMS

PTM鑒定LC-MSMS
糖基化糖基化位點LC-MSMS
糖型分析及含量LC-FLR-MS
純度單體,聚體純度SEC-HPLC,SDS-PAGE,WB
非糖基化重鏈,小分子片段rCE-SDS
內毒素Kit
電荷異質性電荷異構體分布IEX-HPLC
pI及不同pI組分的分布CE-IEF / cIEF
穩定性變性溫度Tm的測定DSF

(1)結合活性


在篩選抗體藥物的早期,采用ELISA 以及FACS方法可以幫助我們快速從大量候選分子中鎖定候選分子,同時通過ELISA以及FACS技術對候選分子在蛋白水平和細胞水平的結合活性進行確認,可以將抗體藥項目快速推進到體內篩選階段。因此,百奧賽圖表征分析服務團隊建立了完備的生化分析平臺。

 

CTLA-4抗體的親和力試驗


 

親和力是判斷分子間相互作用的重要參數之一,尤其是抗體藥篩選階段,親和力是了解分子識別及生物學過程的重要指標,對于藥效的評價尤其重要,因此需要對分子間相互作用進行全面的研究,包括其分子間的結合快慢,結合的強弱等等。

分子間相互作用分析,利用SPR技術測定人CTLA4(A)或食蟹猴CTLA4(B)蛋白的親和力代表性數據。

Biacore是基于表面等離子體共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)技術來實時跟蹤生物分子間的相互作用,而不用任何標記物的技術,是被公認的檢測分子互作的金標準。與傳統檢測手段比較,SPR方法具有無需對樣品進行標記,實時監測,靈敏度高等突出優點。

百奧賽圖表征分析服務團隊配備兩臺檢測分子間相互作用的儀器Biacore T200以及Biacore 8K,兩種儀器各有特點,相互補充,為分子間相互作用檢測提供全方位快速準確的服務體系。


(2)理化性質分析


抗體藥的理化性質已經成為醫藥工業質量控制的重要環節。它作為蛋白質樣品的主要特征參數之一,在抗體藥物開發的早期,是確定一種新型抗體是否能夠進行后續研究活動的重要前提,是決定候選分子是否能夠成藥的關鍵步驟。

百奧賽圖表征分析服務團隊配備有Agilent 1260 Infinity 液相色譜系統,Maurice毛細管電泳儀以及Waters Xevo G2-XS Q-Tof高分辨質譜等儀器,建立了完善的理化分析平臺,用以表征開發階段的抗體理化性質,指導抗體藥下一步的開發進程。

產品生物化學和生物物理表征分析能力:

分子量分析

完整分子量

還原分子量

脫糖分子量

肽圖

氨基酸序列覆蓋率分析

二硫鍵分析

穩定性研究

快速N-糖分析

N-糖基化位點

O-糖基化位點等等

 

(3)內毒素檢測


內毒素系指細菌的死體或細菌代謝產物,其主要成分是產生于革蘭氏陰性菌細胞外壁層的之多糖類物質。內毒素作為一種熱源,會導致生物機體產生炎癥、發熱等反應,所以一般涉及到細胞或動物實驗時,對內毒素需要進行控制或者去除,以免對實驗產生不良結果。

內毒素檢測是利用鱟實際能與內毒素產生凝集反應的特點,來檢測內毒素的含量。具體的檢測方法是絕對定量的鱟試劑顯色法,檢測范圍在0.1-1EU/mL。


(4)純度鑒定


?SEC-HPLC:利用多孔凝膠固定相,根據分子大小的差異來分離的一種液相色譜方法。SEC-HPLC在分子量大的范圍內分離效果相對較好,分離時間也很短,而且操作簡便快捷,數據可靠且重現性好。

?SDS-PAGE是聚丙烯酰胺凝膠電泳中最常用的一種蛋白表達分析技術。根據待測樣品中蛋白質分子量大小的不同,使其在電泳膠中分離。用于檢測蛋白的表達量和分析蛋白純度。SDS-PAGE的電泳分離度非常高,例如兩個蛋白相差1kD,都可以在SDS-PAGE膠上體現出來,根據對樣品處理方式的不同,SDS-PAGE分為還原SDS電泳、非還原SDS電泳。


(5)報告基因檢測系統及內吞實驗


生物學功能或者活性檢測方法的開發是生物治療研發過程中的挑戰之一,為此我們建立了基于報告基因的報告細胞系統,可以用于高通量的篩選具有特定激活或者抑制功能的抗體藥。




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