基于CRISPR / EGE?的基因編輯技術

CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一種細菌降解入侵病毒DNA和其他外源DNA的防御機制。來源于化膿鏈球菌的CRISPR / Cas9系統是目前最常用的一種。

Cas9蛋白首先與crRNA和tracrRNA結合形成復合物,然后結合靶序列形成RNA-DNA復合物,最終使DNA發生雙鏈斷裂。

crRNA識別靶DNA序列,tracrRNA是保持Cas9活性的必要組件。為了簡化實驗室中的基因編輯流程,將crRNA和tracrRNA融合在一起制備Single Guide RNAs(sgRNAs)??梢酝ㄟ^用同時表達sgRNA和Cas9蛋白的質粒轉染細胞來編輯靶基因。 CRISPR / Cas9技術已成功用于細菌,酵母,植物,魚類和哺乳動物,是最有效的基因編輯技術。

利用標準的CRISPR / Cas9技術,外源DNA與目標基因之間的同源重組(HR)效率比較低。百奧賽圖自主開發了高效的基因編輯(Extreme Genome Editing,EGE?)系統,與標準CRISPR / Cas9技術相比,可將同源重組效率提高10-20倍。使用EGE?系統進行基因編輯更快,更便捷。 EGE?技術可以精確編輯幾乎任何基因組位點的DNA序列,是制備多種基因編輯大小鼠模型的理想選擇。


優勢:

速度快最快約2個月獲得F0代陽性小鼠,5個月獲得F1代小鼠
零風險在強大的生產平臺的支持下,如果項目失敗,客戶將獲得全額退款
高效率與標準CRISPR/Cas9技術相比,EGE?系統介導的同源重組效率提高了10-20倍
高質量堅持Southern blot篩選,可較大程度減少隨機插入引起的后續實驗風險
多樣化大片段敲除,條件性敲除和基因敲入等
無物種限制細胞系,小鼠,大鼠,豬,猴子和斑馬魚等

 

服務流程:

技術危機

嚴格的質量控制:

Southern blot排除隨機插入

對大量數據統計分析發現,基于CRISPR/Cas9技術的基因編輯課題中隨機插入概率約為32%(來自打靶載體)。而在這32%中14%的隨機插入無法依靠交配傳代去除。排除隨機插入的金標準是Southern blot檢測。百奧賽圖堅持進行Southern檢測,以確?;蚓庉嫬@得的動物無隨機插入。


技術嚴格質量控制

技術可靠性服務


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